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資訊詳情
CCL28如何通過誘導RARβ的表達抑制口腔鱗狀細胞癌骨侵襲-II
發布時間:2020-01-03 10:04:00   資訊來源:JCI, 2019

【主要看點】

通過細胞遷移實驗、Western Blot、細胞信號通路篩選陣列等技術,發現并驗證了關鍵因子CCL28通過CCR10激活RAR信號通路,從而抑制口腔鱗狀細胞癌的侵襲及EMT。

 

【資料來源】

JCI, 2019, CCL28-induced RARβ expression inhibits oral squamous cell carcinoma bone invasion.

Fig.2 CCL28 inhibits OSCC cell invasion via CCR10 and is associated with carcinogenesis and survival in patients.

Fig.3 The CCL28/CCR10 axis inhibits OSCC cell invasion by activating RAR signaling.

 

【關鍵知識】

CCR趨化因子CC的受體,為含7次跨膜結構的G蛋白偶聯受體,主要通過G蛋白轉導信號。

RAR視黃酸受體,包括了α、β、γ三種亞型。是細胞核激素受體,是一類配體依賴的轉錄因子。

 

【結果展示】

Step 1在Ca9.22及YD10B細胞中,通過shRNAs分別抑制CCL28、CCR3、CCR10的表達,經Western Blot驗證抑制效果后,檢測了在有無CCL28的情況下,相關基因表達被抑制前后的細胞遷移變化情況。

* CCR3、CCR10為目前已有報道的CCL28受體。

實驗結果顯示,CCL28的表達被抑制后細胞遷移情況明顯上升,經加入CCL28處理后細胞遷移情況明顯下降;而CCR3、CCR10的表達被抑制后細胞遷移情況無明顯變化,但經加入CCL28處理后,CCR3被抑制的細胞遷移情況同樣被下調,而CCR10被抑制的細胞遷移情況則無明顯變化。相關結果均表明,CCL28是通過CCR10發揮抑制細胞遷移的作用。

Step 2針對頭頸部鱗狀細胞癌,在TCGA數據庫中,對關鍵因子CCL28、CCR3、CCR10的表達及臨床數據進行挖掘及分析。

數據分析結果顯示,與正常細胞相比,頭頸部鱗狀細胞癌中CCL28的表達水平明顯下調,CCR3、CCR10的表達情況則無明顯變化;而在頭頸部鱗狀細胞癌病人的生存分析中,CCL28、CCR10高表達的情況下生存率明顯升高,CCR3的表達情況對生存率則無明顯影響。相關結果均表明,CCL28、CCR10均與頭頸部鱗狀細胞癌病患的致癌作用和預后有關,驗證了上一步中的結果。

Step 3在經CCL28處理的Ca9.22及YD10B細胞中敲除CCR10,通過細胞信號通路篩選陣列實驗,分別對敲除前后的細胞進行信號通路激活情況的檢測。

實驗結果顯示,CCR10被敲除后,CCL28對RARE信號通路的激活作用則明顯降低。

Step 4針對頭頸部鱗狀細胞癌,在TCGA數據庫中,對關鍵因子CCL28、RARB、RA特征進行挖掘及相關性分析,并通過Western Blot進行驗證。

數據分析結果顯示,CCL28與RARB、RA特征均存在正相關;而實驗結果顯示,RUNX3缺失的OSCC細胞中,CCL28的加入可使RARβ、RARβ2的表達上調,而在HSC細胞中則無明顯變化。

Step 5對Ca9.22及YD10B細胞進行CCL28的過表達及敲除處理,其后通過Western Blot,驗證處理效果,并檢測RARβ、RARβ2的表達情況。

實驗結果顯示,當CCL28過表達時RARβ、RARβ2的表達上調,當CCL28被敲除后RARβ、RARβ2的表達下調。

Step 6在Ca9.22及YD10B細胞中,分別對CCR3、CCR10進行敲除處理,其后通過Western Blot,檢測CCL28處理前后RARβ、CCR3、CCR10的表達情況。

實驗結果顯示,CCL28的處理對CCR3、CCR10的表達情況無明顯影響。當CCR3被敲除后,RARβ的表達隨CCL28的加入仍明顯升高;當CCR10被敲除后,CCL28的加入對RARβ的表達則無明顯影響。

Step 7分別對Ca9.22及YD10B細胞進行CCL28處理,經細胞遷移實驗,檢測了在不同濃度的藥物處理下細胞遷移變化情況。

* LE135為RARβ的選擇性拮抗劑,BMS493為pan-RARs的反向激動劑。

實驗結果顯示,LE135、BMS493均阻斷了CCL28介導的細胞遷移抑制。相關結果均表明,CCL28/CCR10通過促進RARβ(尤其是RARβ2)的表達而抑制OSCC細胞的遷移。

 

【相關試劑】

WB檢測試劑盒 凱基,KGP1201,10 tests,945元

6-petal GradientEZ 3D cell migration Lena Biosciences,GT 2019LS-001,2399-2699元

6-lobe GradientEZ 3D cell migration Lena Biosciences,GT 2019LS-002,2399-2699元

CCR3 Rabbit pAb ABclonal,A285,WB/IHC,50uL,900元

RARB Rabbit pAb ABclonal,A1603,WB/IHC/IF,50uL,900元

siRNA制備服務 凱基,三保一套餐(3對目的基因 siRNA、1對陰性對照 siRNA、1對FAM 標記陰性對照 siRNA、1對陽性對照 siRNA),1599元

 

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