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資訊詳情
CCL28如何通過誘導RARβ的表達抑制口腔鱗狀細胞癌骨侵襲-I
發布時間:2020-01-03 10:17:55   資訊來源:JCI, 2019

【主要看點】

通過qRT-PCR、細胞遷移實驗、免疫熒光等技術,發現并初步驗證了受RUNX3調控的關鍵因子CCL28可抑制口腔鱗狀細胞癌的侵襲及EMT。

 

【資料來源】

JCI, 2019, CCL28-induced RARβ expression inhibits oral squamous cell carcinoma bone invasion.

Fig.1 CCL28 inhibits invasion and EMT in OSCC cells.

 

【關鍵知識】

EMT上皮間充質轉化(epithelial-mesenchymal transition),是指上皮細胞通過特定程序轉化為具有間質表型細胞的生物學過程。其主要的特征有細胞黏附分子(如E-鈣粘蛋白)表達的減少、細胞角蛋白細胞骨架轉化為波形蛋白(Vimentin)為主的細胞骨架及形態上具有間充質細胞的特征等。通過EMT,上皮細胞失去了細胞極性,失去與基底膜的連接等上皮表型,獲得了較高的遷移與侵襲、抗凋亡和降解細胞外基質的能力等間質表型。EMT是上皮細胞來源的惡性腫瘤細胞獲得遷移和侵襲能力的重要生物學過程。

RUNX3RUNX蛋白家族成員之一,是TGF-β信號轉導通路下游的一個轉錄因子。目前關于RUNX3在癌癥中的作用仍存在爭議,在胃癌、乳腺癌、結腸癌、肝癌等多種腫瘤中呈低表達、正常組織中高表達,而在惡性黑素瘤、基底細胞癌、鱗狀細胞癌中正好相反;在頭頸部腫瘤組織標本中存在RUNX3過表達的現象,這種過表達的行為可促進細胞的增殖及骨侵襲。

 

【結果展示】

Step 1通過qRT-PCR實驗,在RUNX3正常表達及被敲除的Ca9.22細胞中,分別檢測受RUNX3調控的趨化因子及其受體的表達水平,并進行比較。

實驗結果顯示,在89個相關因子中,RUNX3被敲除后CCL28的表達被顯著上調。

Step 2分別在缺失及正常表達TGF-β的Ca9.22及YD10B細胞中,通過細胞侵襲實驗,檢測了在不同CCL28濃度水平下,相關細胞的侵襲變化。

實驗結果顯示,CCL28可抑制OSCC細胞的侵襲。

Step 3分別在缺失及正常表達TGF-β的Ca9.22及YD10B細胞中,通過細胞免疫熒光、Western Blot實驗,檢測了在不同CCL28濃度水平的情況下,E-鈣粘蛋白及部分EMT相關轉錄因子(Slug,Twist,Snail)的表達變化。

實驗結果顯示,CCL28的處理后的OSCC細胞,E-鈣粘蛋白的表達上調、EMT相關轉錄因子的表達下調。

Step 4分別在缺失及正常表達TGF-β的Ca9.22及YD10B細胞中,通過Western Blot實驗,檢測了在有無CCL28的情況下,β-catenin在細胞質、細胞核內的表達變化。

*β-catenin(β-連環蛋白),是一種多功能蛋白,通過與細胞骨架的相互作用,協助細胞對細胞外的信號和影響作出反應;這種蛋白在細胞核內充當轉錄因子,啟動促使細胞分裂的基因。

實驗結果顯示,CCL28可使OSCC細胞中的β-catenin從核往質轉移。

 

【相關試劑】

Super一步法RT-PCR(M-MLV)試劑盒 凱基,KGA1336,20 tests,373元

Super一步法RT-PCR(AMV)試劑盒 凱基,KGA1331,20 tests,441元

WB檢測試劑盒 凱基,KGP1201,10 tests,945元

6-petal GradientEZ 3D cell migration Lena Biosciences,GT 2019LS-001,2399-2699元

6-lobe GradientEZ 3D cell migration Lena Biosciences,GT 2019LS-002,2399-2699元

E-Cadherin Rabbit pAb ABclonal,A3044,WB/IHC/IF,50uL,900元

Beta Catenin Rabbit pAb ABclonal,A11932,WB/IF/IP,50uL,1200元

 

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